羟甲基化-简化基因组甲基化/羟甲基化测序(oxRRBS+RRBS)
DNA羟甲基化是近年发现的一种新的DNA修饰并迅速成为研究热点。随着研究的深入,发现之前被认为是检测DNA
甲基化“金标准”的重亚硫酸盐测序并不能区分DNA甲基化(5mC)和DNA羟甲基化(5hmC)。易基因联合剑桥大学建
立了化学氧化法结合重亚硫酸盐转化的测序技术(oxidative bisulfite sequencing, oxBS-Seq),该技术不仅可以精确
检测DNA甲基化,排除DNA羟甲基化的影响,还可以双文库结合同时单碱基分辨率精确检测DNA羟甲基化。
技术优势
1. DNA甲基化检测全新的“金标准”
2. 全基因组单碱基检测DNA羟甲基化修饰
3. 多重标准验证高氧化效率和高Bisulfite转换率
4. 实验偏好性低,重复性高(R²>0.98)
5. 可满足多种测序应用需求:简化基因组氧化甲基化测序(oxRRBS),目标区域
氧化甲基化测序(Target-oxBS)
实验策略
信息分析
技术参数
研究案例
oxRRBS+RRBS单碱基水平检测炎症性肠炎(IBD)小鼠模型的结肠组织DNA甲基化和羟甲基化
Han Q,et al.Multi-Omics Characterization of Inflammatory Bowel Disease-Induced Hyperplasia/Dysplasia in the Rag2
-/-/Il10-/- Mouse Model. Int J Mol Sci. 2020 Dec 31;22(1) pii: ijms22010364.
1、背景:
多项研究表明炎症性肠炎(IBD)中存在基因组DNA甲基化失调,然而对DNA羟甲基化水平变化则关注有限。此前的研究未能分别绘制5hmC和
5mC这两种表观遗传标记,限制了对IBD和结直肠癌(CRC)表观遗传机制的理解。
2、方法:
该研究利用RRBS+oxRRBS技术分别绘制了Rag2-/-/Il10-/- H. hepaticus感染的IBD小鼠模型近端结肠组织DNA甲基化和羟甲基化图谱,
进行DNA甲基化/羟甲基化差异分析和相应的转录组关联分析。
3、结论:
本研究利用RRBS+oxRRBS技术鉴定出1606个差异甲基化区域(DMR)和3011个差异羟甲基化区域(DhMR)。这些DMR / DhMR与胃肠道疾
病、炎症性疾病和癌症相关的基因重叠。研究表明慢性炎症会引发基因组甲基化和羟甲基化模式改变,肿瘤发生的关键基因表达变化,并可
能导致结直肠癌的发生。
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亮点研究|oxRRBS+RRBS揭示牦牛下丘脑在神经调节和髓鞘形成中的表观调控机制