RIP-seq细胞样品送样标准（版本：2025年10月）
RIP-seq细胞样品送样标准
细胞总量:
1x10^7次方个培养的细胞
细胞收样方式:
一、 冻存液梯度降温后寄送
贴壁细胞
1）从培养箱中取出贴壁培养细胞，显微镜下观察细胞，确定生长状态良好且无污染；
2） 弃去培养基，向细胞培养瓶或培养皿中加入5 ml 预冷的PBS，洗2次；
3）弃尽PBS，加入适量胰酶，放回37℃培养箱中消化，利用完全培养基终止反应；
4） 按照 5*10^6次方-10^7次方细胞每管进行分装，准确标记后将分装好的细胞 4°C、500 g 离心 5 分钟；
5） 吸去全部液体，加入 500 μl冷 PBS 洗涤，4°C、500 g 离心 5 分钟；
6） 吸去全部液体，加入1mL 预冷的细胞冻存液，轻轻吹打细胞沉淀混匀，梯度降温冻存（冻存常用方法：4℃ 30 min-1h→ -20℃ 30 min-2h→ -80℃ 16～18 h（过夜）→液氮）；
7）液氮速冻，-80℃保存。
注意：活率85%以上，避免支原体和微生物污染；建议送2份，一份备份。
悬浮细胞
1） 确定细胞生长状态良好且无污染；
2） 按照5*10^6次方-10^7次方细胞每管进行分装，准确标记后将分装好的细胞 4°C、500 g 离心 5 分钟；
3） 吸去全部液体，加入500 μl冷 PBS 洗涤，4°C、500 g 离心 5 分钟；
4） 吸去全部液体，加入1mL 预冷的细胞冻存液，轻轻吹打细胞沉淀混匀，梯度降温冻存（冻存常用方法：4℃ 30 min-1h→ -20℃ 30 min-2h→ -80℃ 16～18 h（过夜）→液氮）；
5）液氮速冻，-80℃保存。
注意：活率85%以上，避免支原体和微生物污染；建议送2份，一份备份。
二、细胞沉淀
贴壁细胞
① 去培养液，预冷PBS洗3次，吸净；
② 加少量冷PBS，刮刀刮下或用胰酶消化，终止消化后移入15 mL管，4 °C 1 000 g × 5 min；
③ 弃上清，冷PBS 1 mL重悬，转入1.5 mL管，同速离心；
④ 去尽液体，液氮速冻，-80 °C保存。
悬浮细胞
① 4 °C 1 000 g × 5 min收菌，弃上清；
② 冷PBS洗3次，吸净；
③ 1 mL冷PBS重悬，转入1.5 mL管，再次离心；
④ 去尽残液，液氮速冻，-80 °C保存。
