m7G甲基化常规mRNA甲基化测序( MeRIP)

N7-甲基鸟苷(N7-methylguanosinem7G)是真核生物tRNArRNAmRNA 5'cap中最丰富的修饰之一。作为一种重要的表观遗传修饰,m7G RNA甲基化在基因表达、加工代谢、蛋白质合成、转录稳定等方面发挥着重要的作用,参与疾病发生发展等多种生命过程。

 

对于m7G RNA甲基化修饰的检测,易基因采用基于抗体富集的m7G-MeRIP-seq,利用m7G特异性抗体富集发生m7G甲基化修饰的RNA片段(包括mRNAlncRNArRNA去除所有RNA),结合高通量测序,对RNA上的m7G修饰进行定位与定量,总RNA起始量可降低至10μg,最低仅需1μgRNA



技术优势:

Ø  起始量低:样本起始量可降低至10-20μg,最低仅需1μgRNA

Ø  高通量测序:全转录组m7G位点高通量测序,可同时检测mRNAlncRNA

Ø  样本要求:可用于动物、植物、细胞及组织的m7G检测;

Ø  重复性高:m7G-MeRIP-seqIP富集重复性高,最大化降低抗体富集偏差;

Ø  应用范围广:广泛应用于组织发育、干细胞自我更新和分化、热休克或DNA损伤应答、癌症的发生与发展、药物应答等研究领域。

 

 

技术路线:




送样要求:

Ø  样本类型:去蛋白并进行DNase处理后的完整总RNA样本;

Ø  样本总量:10μg;

Ø  样本浓度:建议≥250 ng/μL;

样本完整度:RIN ≥ 7Ratio 28S/18S ≥ 0.7;某些来源样本(如体液样本,昆虫样本,水生生物样本等)无RINRatio28S/18S要求;



典型案例

哺乳动物转录组范围mRNAm7G RNA甲基化图谱

Transcriptome-wide Mapping of Internal N7-methylguanosine Methylome in Mammalian Messenger RNA

 

背景

m7G RNA甲基化在真核mRNA中的存在和分布有待研究。

 

方法

本研究开发了基于抗体富集m7G RNA甲基化修饰测序方法:基于抗体富集的m7G-MeRIP-seq

 

结果

本研究作者使用m7G-MeRIP-seqRNAm7G甲基化进行转录组范围的高通量测序分析,揭示了人和小鼠细胞内m7G甲基化水平(mRNA分布、富集的共有motif等)。另外,作者将METTL1基因鉴定为在mRNA内催化m7G修饰的一种甲基转移酶,表明RNAm7G甲基化可影响mRNA翻译。

Zhang LS, et al. Transcriptome-wide Mapping of Internal N7-Methylguanosine Methylome in Mammalian mRNA. Mol Cell. 2019 Jun 20;74(6):1304-1316.e8.



图:m7G-MeRIP-seq绘制的人和小鼠细胞系内m7G位点的转录组范围分布图



参考文献:

Zhang LS, et al. Transcriptome-wide Mapping of Internal N7-Methylguanosine Methylome in Mammalian mRNA. Mol Cell. 2019 Jun 20;74(6):1304-1316.e8.