甲基化-简化基因组甲基化测序(RRBS/ dRRBS/ XRBS)


简化甲基化测序(Reduced Representation Bisulfite Sequencing,RRBS)是利用限制性内切酶对基因组进行酶切,富集启动子及CpG岛等重要的表观调控区域并进行重亚硫酸盐测序。该技术显著提高了高CpG区域的测序深度,在CpG岛、启动子区域和增强子元件区域

可以获得高精度的分辨率,是一种准确、高效、经济的DNA甲基化研究方法,在大规模

临床样本的研究中具有广泛的应用前景。为了适应科研技术的需要,我们进一步开发了可在更大区域内

捕获CpG位点的双酶切RRBS(dRRBS),研究更广泛区域的甲基化,包括CGI shore等区域。


为助力低样本量多维度分析,我们开发了富集覆盖CpG岛、启动子、增强子、CTCF结合位点的甲基化靶向测序方法:extended-representation bisulfite sequencing

(XRBS),实现了高灵敏度和样本复用,使其具有高度可扩展性,并适用于有限的样本和单个细胞。


技术优势


1. 精确度高:在其覆盖范围内可达到单碱基分辨率;
2. 重复性好:多样本的覆盖区域重复性可达到85%-95%,适用于多样本间的差异分析;

3. 性价比高:测序区域针对高CpG区域,数据利用率更高。


实验策略



信息分析




技术参数




研究案例


DNA甲基化的改变对癌症细胞侵袭能力的影响

Antje Hascher, et al. (2013) DNA Methyltransferase Inhibition Reverses Epigenetically Embedded Phenotypes in Lung Cancer 

Preferentially Affecting Polycomb Target Genes. Clin Cancer Res; 20(4); 814‒26.



1、背景:

癌细胞的表型在一定程度上由表观决定,比如DNA甲基化。癌症发展后期的转移特性可能与表观遗传修饰的改变有关。


2、方法:

利用RRBS技术检测具有高侵袭性的非小细胞肺癌细胞系(A549和HTB56)以及相应经过甲基化抑制剂氮杂胞苷(azacytidine)处理过的细胞

系的甲基化修饰。探讨甲基化的改变对肺癌细胞系的侵袭能力的影响。


3、结论:

高侵袭性细胞系在发展过程中,DNA甲基化修饰发生了广泛的改变。同低侵袭能力的细胞系相比,RRBS检测到的CpG富集的区域中有2.5%

的区域发生了差异修饰。当使用了DNA甲基化抑制剂azacytidine,伴随着这些高甲基化修饰的位点出现甲基化修饰的丢失,细胞系的侵袭能

力也发生了逆转。






点击下方阅读全文

表观组学|优化版简化甲基化测序(RRBS/dRRBS/XRRBS)