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m6A甲基化-常规mRNA 甲基化测序(MeRIP)
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m6A甲基化-常规mRNA +lncRNA甲基化测序(lnc-MeRIP)
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m6A甲基化-微量mRNA +lncRNA甲基化测序(Micro- lnc-MeRIP)
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m5C甲基化-常规mRNA 甲基化测序(RNA-BS)
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m5C甲基化-常规mRNA +lncRNA甲基化测序(lncRNA-BS)
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m5C RNA甲基化测序(m5C MeRIP-seq)
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m1A 甲基化常规mRNA甲基化测序(MeRIP)
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m1A甲基化常规mRNA +lncRNA甲基化测序( lnc MeRIP)
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m1A甲基化微量mRNA +lncRNA甲基化测序( Micro lnc MeRIP)
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m7G甲基化常规mRNA甲基化测序( MeRIP)
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m7G甲基化常规mRNA +lncRNA甲基化测序( lnc MeRIP)
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m7G甲基化微量mRNA+lncRNA甲基化测序( Micro lnc MeRIP)
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RNA甲基化液相色谱串联质谱法 (LC-MS/MS)
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ac4C乙酰化RNA免疫沉淀测序(acRIP-seq)
m1A甲基化微量mRNA +lncRNA甲基化测序( Micro lnc MeRIP)
1)m1A甲基化-常量mRNA 甲基化测序(m1A-seq)
2)m1A甲基化-常量mRNA +lncRNA甲基化测序(lnc-m1A-seq)
技术优势:
1)起始量低:样本起始量可降低至10-20μg,最低仅需1μg总RNA;
2)转录组范围内:可以同时检测mRNA和lncRNA;
3)样本要求:可用于动物、植物、细胞及组织的m1A检测;
4)重复性高:IP富集重复性高,最大化降低抗体富集偏差
5)应用范围广:广泛应用于组织发育、干细胞自我更新和分化、热休克或DNA损伤应答、癌症的发生与发展、药物应答等研究领域。
技术路线:
实验策略:


图:微量MeRIP-seq实验流程
分析内容:

送样要求:
典型案例
真核生物mRNA中的m1A甲基化动态变化研究
The dynamic N1-methyladenosine methylome in eukaryotic messenger RNA
背景:
m1A RNA甲基化发生在Watson-Crick区域,可能影响RNA碱基配对,还促进腺苷修饰在生理条件下带正电荷,可能会显著改变RNA结构和蛋白质-RNA互作。
方法:
研究人员对人HeLa(宫颈腺癌),HepG2(肝细胞癌)和HEK293(胚胎肾)细胞系(ATCC)和原代小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)(C57BL / 6,ATCC)进行基于抗体富集的RNA甲基化免疫沉淀测序(MeRIP-seq,m1A-seq),在转录组范围定位m1A位点,并将其与Dimroth重排反应进行耦联以获得高分辨率m1A图谱。
结果:
m1A-seq结果表明m1A在第一个剪接位点上游起始密码子周围富集:m1A倾向于修饰翻译起始位点周围一些更结构化的区域,可以对生理条件做出动态响应,并与蛋白质生成呈正相关。这些特异性特征在小鼠与人类细胞中高度保守,证明了m1A在促进mRNA甲基化翻译中发挥作用。
参考文献:
1)Dominissini D, et al. The dynamic N(1)-methyladenosine methylome in eukaryotic messenger RNA. Nature. 2016 Feb 25;530(7591):441-6. pii: nature16998.